Nos tutelles

CNRS

Rechercher





Accueil > Recherche > BioPhysique > Photophysique et ingénierie de biosenseurs et protéines fluorescentes > Nouvelles méthodes analytiques en cellule vivante

Nouvelles méthodes analytiques en cellule vivante


Approches par spectroimagerie de fluorescence

La détermination de paramètres physico-chimiques en cellule vivante requiert des méthodes adaptées à la complexité et aux contraintes des milieux biologiques. Nous travaillons à la mise au point de techniques d’imagerie robustes, quantitatives et multimodales, qui s’appuient sur une parfaite connaissance des processus photophysiques sous-jacents et le développement d’instruments dédiés, comme le microscope FLIM BI-FLUOR (Plateforme SpICy).

Nous avons récemment exploité la durée de vie de fluorescence de la ECFP pour suivre, après validation et calibration, les modifications dynamiques du pH dans les granules de sécrétion de cellules. Cet outil a contribué à montrer que la sous-unité membranaire V0 de l’ATPase vacuolaire (V-ATPase) agit comme senseur du pH intra-granulaire dans le contrôle de la machinerie d’exocytose (Poea-Guyon 2013 J Cell Biol).

Références

  • Grailhe R, Merola F, Ridard J, Couvignou S, Le Poupon C, Changeux JP, Laguitton-Pasquier H (2006) Monitoring protein interactions in the living cell through the fluorescence decays of the Cyan Fluorescent Protein. ChemPhysChem 7:1442–1454.
  • Kim J, Kwon D, Lee J, Pasquier H, Grailhe R (2009) The use of cyan fluorescent protein variants with a distinctive lifetime signature. Molecular BioSystems 5:151. doi : 10.1039/b815445g
  • Boucherie S, Decaens C, Verbavatz J-M, Grosse B, Erard M, Merola F, Cassio D, Combettes L (2013) Cadmium disorganises the scaffolding of gap and tight junction proteins in the hepatic cell line WIF B9. Biology of the cell 105:561–75. doi : 10.1111/boc.201200092
  • Poea-Guyon S, Ammar MR, Erard M, Amar M, Moreau AW, Fossier P, Gleize V, Vitale N, Morel N (2013) The V-ATPase membrane domain is a sensor of granular pH that controls the exocytotic machinery. The Journal of Cell Biology 203:283–298.